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          首頁 > 生物資訊 > 技術資料 > PeproTech細胞因子溶解稀釋方法

          PeproTech細胞因子溶解稀釋方法

          作者:聯科生物    發布日期:2019-04-09 08:20


          一、查看說明書

          1. 確定合適的溶解液

          收到產品后,首先應查看說明書中細胞因子儲存和處理的方法。見下圖:

          2. 確定合適的溫度

          圖中的表格給出了細胞因子在凍干粉(lyophilized)狀態下的溶解(reconstituted)和稀釋(extended storage)的儲存溫度以及時間,您可以根據自己的實際需要選擇。


           

          二、溶解

          1. 離心

          收到的管子內為凍干粉,開蓋前要快速離心10000-12000rpm x 30s。
          2. 溶解

          根據說明書紅色標識地方的描述,選擇合適的溶解液,溶解到后邊的濃度范圍內。如此可以確保蛋白充分溶解復性,保證產品質量。請不要使用非建議溶液溶解。

          目的:使細胞因子從無活性的凍干粉狀態充分溶解復性成為有活性的蛋白溶液。

          注意:不要用渦旋振蕩儀劇烈渦旋,可以用槍頭輕輕吹打幾次助溶。有的細胞因子溶解比較慢,需要在室溫靜置或者搖床低速搖一段時間使充分溶解。

          3.短期儲存

          溶解后的蛋白溶液可以在2-8度儲存1周。
          4.長期儲存

          如果您的實驗,一周內不能用完。必須將第2步中獲得的溶液用含載體蛋白的溶液進一步稀釋。(詳見:三、稀釋)

          目的:對溶解一步的蛋白溶液進行稀釋凍存。加入載體蛋白可以封閉掉管壁上的蛋白結合位點,且可以在低溫下維持細胞因子的穩定。
           

          三、稀釋

          1. 配制

          配制0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖的稀釋液備用(確保無菌),這三種稀釋液的配制的Buffer可以用PBS或者細胞基礎培養基。使用以上三種稀釋液的任意一種稀釋重懸的蛋白溶液,稀釋濃度根據您的使用濃度確定,不要低于10ug/ml。即可分裝成小管,凍存在-20--80度。
          2.使用方法

          使用時取用一支凍存的細胞因子,加入到您的培養基中至使用濃度。細胞因子應避免反復凍融。


           

          四、你問我答

           
          Q:為什么會有這么多種溶解方法?

          A:蛋白的溶解性與很多因素有關,其中比較重要的是pH值和離子強度。PeproTech的細胞因子或重組蛋白在出廠前均經嚴格測試,說明書上所標明的溶解液是能夠將該細胞因子或重組蛋白完全溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強度與說明書中所標明的不符,很多時候會造成細胞因子或重組蛋白不能完全溶解或者根本無法溶解,這樣所配得的細胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。


          Q:高于或低于該濃度范圍會有什么問題呢?

          A:首先,細胞因子或蛋白會不穩定,即很容易出現活性下降的現象。其次,高于這個濃度范圍,可能會超過該蛋白的最大溶解濃度,即蛋白無法完全溶解。再者,高于或低于該濃度范圍,蛋白可能會出現聚集(aggregation),最終結果還是部分蛋白未溶解,導致蛋白活性的減弱。


          Q:若想保證溶解液與凍干粉充分混勻,以實現細胞因子或重組蛋白的完全溶解,該怎么辦呢?
          A:多數細胞因子或重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的,一般我們用移液槍的槍頭輕吹幾下,即可使細胞因子或重組蛋白完全溶解。

          對于不易溶解的細胞因子或蛋白,PeproTech會在說明書中進行備注(Note)。如在重組人IL-13(產品編號:200-13)的說明書中您會看到:Slow to dissolve (緩慢溶解),在重組人IL-11(產品編號:200-11)的說明中會看到:This solution is slow to dissolve(該溶液溶解緩慢)。這種情況下,您最好能將要溶解的細胞因子或重組蛋白放在水平搖床(shaker)上低速搖一段時間,促使細胞因子或重組蛋白完全溶解。有些蛋白,如重組人IL-13 Variant (產品編號:200-13A)雖然難溶,但卻不需用搖床來加速溶解。其說明書上的備注為:Allow the reconstituted vial to sit at 4度 for at > 2 hours before use. (將重懸液在4度靜置2小時以上)。

           


          五、注意事項

          1. 一定要用推薦的溶液溶解凍干粉

          2. 一定要溶解到指定的濃度。

          3. 一定不能振蕩(vortex)。

           

          六、溶解稀釋套裝

          聯科生物細胞因子溶解稀釋套裝外觀為無色澄清透明的液體,無明顯異物,無菌,適用于細胞因子的溶解和稀釋,使用方便,簡單操作,可高效溶解并穩定保存相應的細胞因子。

          類別   目錄號   產品名稱(簡述)   規格
          溶解稀釋套裝   PK002     重組細胞因子溶解稀釋套裝II   1 Kit
                    溶
                   
                    解
              

                    液
            PS0011   去離子水 ( Water )   1 ml
            PS0021   磷酸鈉緩沖液 ( Sodium Phosphate )  5mM  pH 7.4   1 ml
            PS0031   檸檬酸鹽緩沖液 ( Citric Acid )  10mM  pH 3.0   1 ml
            PS0041   醋酸鹽緩沖液 ( Acetic Acid )  100mM   1 ml
            PS0051   Tris緩沖液 ( Tris )  5mM pH7.6   1 ml
            PS0061   1×PBS 緩沖液 ( Phosphate Buffer Solution PBS )   pH7.2   1 ml
            PS0071   磷酸鈉緩沖液 ( Sodium Phosphate )  5 mM  pH 7.2   1 ml
            PS0081   磷酸鈉緩沖液 ( Sodium Phosphate )  5 mM  pH 7.6   1 ml
            PS0091   磷酸鈉緩沖液 ( Sodium Phosphate )  5 mM  pH 8.0   1 ml
            PS0101   5 mM HCl (pH 3.0)   1 ml
            PS0111     磷酸鈉緩沖液 (Sodium Phosphate) 10 mM pH 8.0   1 ml
            PS0121   磷酸鈉緩沖液 (Sodium Phosphate) 10 mM pH 7.5   1 ml
          稀釋液   PD0021   PBS緩沖液 (含5%海藻糖) pH7.2 (PBS containing 5 % Trehalose )   10ml


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