<output id="vanmu"><form id="vanmu"></form></output><output id="vanmu"></output>
<meter id="vanmu"></meter>
    1. <code id="vanmu"></code>
      <acronym id="vanmu"></acronym>
      1. <meter id="vanmu"></meter>
          <code id="vanmu"></code>
          歡迎來到聯科生物!
          請登錄|注冊
          全部分類
          首頁 > 生物資訊 > 技術資料 > 人 Treg 試劑盒操作步驟

          人 Treg 試劑盒操作步驟

          作者:聯科生物    發布日期:2018-12-06 09:00


          1. 制備 PBMC,并調整細胞濃度至 10^7/ml。


          2. 在每個流式上樣管中加入 100 μl 準備好的細胞懸液,細胞數約為 1×10^6 個。


          3. 按照細胞表面抗原染色方法標記 CD4 和 CD25。根據說明書和抗體管上的標識確定抗體用量(一般來說是 20ul,可能隨批次有差異)。按個人要求設置空白管、對照管、補償管和樣本管。4℃ 孵育 30 分鐘。


          4. 用預冷 PBS 溶液洗滌細胞,300-400 g 離心 5 分鐘,去上清。


          5. 用 3 倍體積的固定/破膜稀釋液 稀釋 固定/破膜濃縮液,制成固定/破膜工作液,注意要新鮮配制,每個樣本的用量為 1ml。


          6. 旋渦震蕩重懸細胞后加入 1ml 的固定/破膜工作液(Fixation/Permeabilization)(1:3 稀釋好),并再次旋渦混勻。


          7. 避光 4℃ 孵育 30 分鐘到 60 分鐘。


          8. 將破膜緩沖液用去離子水 1:9 稀釋,制成工作液。每個樣本的用量為 8.5ml。


          9. 無需洗滌,直接加入 2ml 破膜緩沖液工作液(Permeabilization Buffer)300-400 g 離心洗滌細胞并棄去上清液。


          10.(可選)重復第 9 步操作洗滌細胞。


          11. 加入 100 ul PBS 重懸細胞。


          12.(封閉可選)體系中加入 2%的大鼠血清 2 ul,室溫避光孵育 30 分鐘。


          13. 體系加入適量的 Foxp3 抗體,對照管中加入適量的同型對照,具體用量參照說明書,避光 4℃孵育至少 30 分鐘。建議進行預實驗摸索出抗體的最適濃度。


          14. 加入 2ml 破膜緩沖液工作液離心洗滌細胞并棄去上清液。


          15. 重復上一步洗滌細胞。


          16. 用適量體積的 Flow Cytometry Staining Buffer 重懸細胞,并上機檢測并分析。注:由于染色過程中使用了細胞固定和破膜,對比起活細胞在形態上會有一定變化(一般是變小),因此 FSC/SSC 圖中圈門時需要做一定調整。


          注:以上說明書僅供參考,具體實驗請對照附件廠商說明書操作。

          今日推薦
          • 1
          • 2
          • 3
          • 4
          • 5

          總排行

          敗血癥研究之新模型
          在全球范圍內,每年有上百萬人因敗血癥而死亡,這也...[詳情]
          新型生物可吸收貼片獲得 FDA 突破性認定
          開發生物可吸收醫療器械的醫學科技公司 Polyganics 近日...[詳情]
          石墨烯超導重大突破
          2018年3月5日,國際頂尖期刊Nature連刊兩文,以背靠背長...[詳情]
          CAR-T癌癥免疫療法機制新突破
          2018年2月13日最近一項研究表明CAR-T免疫療法不僅能夠用...[詳情]
          新研究揭示自身免疫性腎病如何發生
          2018年3月1日莫納什大學的研究人員已經揭開了一個謎團...[詳情]
          罕見免疫細胞能阻止癌癥擴散
          近日,來自英屬哥倫比亞大學的研究小組發現,10年前...[詳情]
          浙大團隊刊發兩文:抑郁癥研究獲重大突破
          浙江大學醫學院和求是高等研究院胡海嵐團隊在抑郁癥...[詳情]
          PD-1抗體藥物:免疫治療領域的“當紅明星”
          新里程美家國際醫療中心指出:當人體免疫內環境出現...[詳情]
          流式TH亞群新品上線第二波
          聯科生物,專注流式產品15年…… 如果你也從聯科購買...[詳情]
          全國統一客服電話: 400-672-1600 網址:www.g9881.com 郵箱:info@liankebio.com
          版權所有:杭州聯科生物技術股份有限公司
          浙ICP備11037718號-1  浙公網安備 33010502002427號
          在線客服
          在線客服
          • 服務熱線400-6721-600
            工作時間
            8:30-17:30
          二維碼
          Powered By ShopEx
          91福利导航